Посттрансляционные модификации белков (ПМБ) – это ковалентные химические изменения белков (добавление функциональных групп, протеолитическое расщепление регуляторных субъединиц, добавление меток для деградации белка) после их синтеза на рибосоме. ПМБ приводят к изменению третичной структуры белка и расширяют количество их функций. ПМБ принимают участие в различных биологических процессах, таких как: сигналинг, регуляция экспрессии генов, репарация ДНК и контроль клеточного цикла. Также ПМБ являются основным механизмом проведения сигнала стресса внутрь клетки. ПМБ влияют на клеточную дифференцировку, активацию ферментов и рецепторов, взаимодействия между белками, между клетками и между клеткой и внеклеточным матриксом, на время функционирования и деградации белков, растворимость и их локализацию.
Нарушения ПТМ могут приводить к сбою жизненно важных биологических процессов и, как следствие, к патологическим состояниям. Основные заболевания, связанные с нарушением ПМБ, это нейродегенеративные болезни (болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона и болезнь Хантингтона) и рак [2 ].
ПТМ терапевтических моноклональных антител являются маркером качества продукции этих антител. Возможны ПМБ у антител после их синтеза, очистки, хранения или после введения антител в кровоток. Наличие ПМБ у антител влияет на их стабильность, безопасность и эффективность [3]. Некоторые растительные модифицированные белки имеют терапевтическое и диагностическое применение в качестве иммунотоксинов в разработке противораковой терапии [1].
Для изучения ПМБ применяют методы ИГХ, иммунопреципитацию, масс-спектрометрию и достаточно новый анализ лигирования методом близости (PLA). Помимо экспериментальных методов, перечисленных выше, в науке развиваются и компьютерные методы прогнозирования ПМБ с разработкой баз данных [2].
Компания Huabio разработала линейку антител к различным формам модификаций белков (около 500 наименований), таким как:
- фосфорилированные
- метилированные (моно, ди, три-)
- ацетилированные
- убиквитинированные
- cумоилированные
- гидролизованные (расщепленные белки)
Типы антител от Huabio:
- рекомбинантные кроличьи моноклональные
- мышиные моноклональные
- кроличьи поликлональные
Совместимые методы: вестерн-блот, ИФА, иммуногистохимия, иммуноцитохимия, иммунопреципитация, проточная цитометрия.
Реактивность: человек, мышь, крыса, корова, собака, свинья, кролик, овца, рыбка Данио рерио.
Широкий ассортимент антител к модифицированным белкам мы найдем у биотехнологического производителя Huabio (Китай): большое список цитирования говорит сам за себя.
Примеры - 15 цитирований - http://www.huabio.cn/product/Phospho-Akt1-Ser473-antibody-ET1607-73
ET1607-73 Рекомбинантные кроличьи моноклональные антитела Anti-Phospho-Akt1 (Ser473)
Применение: вестерн блот, иммуноцитохимия, иммуногистохимия.
Реактивность: человек, мышь, крыса.
 |
Вестерн-блот на лизатах клеток Hela c использованием антител к Akt1, фосфорилированному по Ser473, к Akt1 ( ET1609-47) и к GAPDH (ET1601-4). Для визуализации использовали вторичные козьи антикроличьи антитела HRP (HA1001). Дорожка 1: голодающие клетки Hela в течение ночи. Дорожка 2: голодающие клетки Hela в течение ночи, а затем инкубированные с 150 нМ инсулином в течение 15 минут. |
R1110-3 Кроличьи поликлональные антитела Anti-Di-mehtyl-Histone H3(Lys4) (1 цитирование) http://www.huabio.cn/product/Di-mehtyl-Histone-H3-Lys4-antibody-R1110-3
Применение: вестерн блот, иммуноцитохимия, иммуногистохимия, проточная цитометрия Реактивность: человек, мышь, крыса
 |
Иммуногистохимия FFPE ткани мышиных семенников с использованием антител к гистону H3, диметилированному по остатку Lys4. Детекцию проводили с применением полимерной системы, конъюгированной с HRP. В качестве хромогена использовали DAB. Ткань также окрашена гематоксилином. |
ET1609-21 Рекомбинантные кроличьи моноклональные антитела к Убиквитину [ST46-03]
Применение: вестерн блот, иммуноцитохимия, иммуногистохимия, проточная цитометрия.
Реактивность: человек, мышь, крыса http://www.huabio.cn/product/Ubiquitin-antibody-ET1609-21
 |
Иммуноцитохимический анализ MCF-7 клеток с использованием первичных антител к Убиквитину и вторичных козьих антикроличьих антител Alexa Fluor®488 (зеленый цвет). Ядра окрашены DAPI (синий). |
Официальным дистрибьютором Huabio в России является компания Микротесты б.м.в.
Литература
1. Майк Розенблюм, Лоренс Чеунг. Модифицированные белки, сконструированные токсины и способы их получения: пат. RU2003127678A 12.02.2002U20
2. Shahin Ramazi, Javad Zahiri, Post-translational modifications in proteins: resources, tools and prediction methods, Database, Volume 2021, 2021, baab012, https://doi.org/10.1093/database/baab012
3. Xu X, Huang Y, Pan H, Molden R, Qiu H, Daly TJ, et al. (2019) Quantitation and modeling of post-translational modifications in a therapeutic monoclonal antibody from single- and multipledose monkey pharmacokinetic studies using mass spectrometry. PLoS ONE 14(10): e0223899. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0223899