Отбор антител методом фагового дисплея
К вопросу об отборе антител методом фагового дисплея:
Моноклональные антитела к бактериофагу M13 (конъюгированные с пероксидазой хрена) компании “HuaBio”
M13 – нитевидный бактериофаг, состоящий из кольцевой одноцепочечной ДНК (ssDNA) длиной 647 нуклеотидов, которая помещена в «чехол» из приблизительно 27 копий большого покровного белка P8, а на концах покрыта 5 копиями различных малых покровных белков (P9, P6, P3). Инфицирование нитевидным бактериофагом не летально, однако вызывает развитие стерильных пятен на газоне E. coli. Нитевидные фаги – группа невирулентных (нелитических) фагов, содержащих кольцевую одноцепочечную ДНК. Семейства Ff, M13, fd и f1 – это невирулентные фаги, используемые в методе фагового дисплея, из них М13 используется наиболее часто.
Плазмиды M13 применяются во многих операциях с рекомбинантной ДНК. Кроме того, изучалось использование этого бактериофага в наноструктурах и нанотехнологиях.
Метод фагового дисплея основан на манипуляциях с генами покровных белков нитевидных фагов – в основном, M13 и Fd. Гибридомная технология и метод фагового дисплея часто используются для получения моноклональных антител. У гибридомной технологии, несмотря на преимущества, есть ограничения: низкая иммуногенность некоторых целевых молекул, высокая стоимость наработки, непредсказуемый иммунный ответ в связи с происхождением антител от грызунов, большие временные затраты и потребность в клетках миеломы.
Метод фагового дисплея – эффективный метод выделения моноклональных антител с высокой аффинностью к целевой молекуле.
Антитела к бактериофагу M13 обычно входят в библиотеки результатов скрининга методом фагового дисплея. Антитела к покровным белкам фага M13 эффективны при отборе и выявлении фагов, экспрессирующих на своей поверхности определённые фрагменты антител или белковые последовательности. Таким образом, метод фагового дисплея делает возможным отбор фрагментов антител, имеющих терапевтический потенциал или научную ценность.
Рис. 1: Результат ELISA-теста антител к бактериофагу M13 (HRP) на связывание с фагом М13
Образцы были стабилизированы с помощью 1% БСА в течение 1 часа при температуре 37°C и инкубировались с первичными антителами (кат. № EM1902-18, 1/10000) в течение 1 часа при температуре 25°C. Антитела к бактериофагу M13 проходили через 4 цикла замораживания-размораживания при температурах -80°C, 4°C, 37°C.
Компания “HuaBio” выпустила моноклональные антитела к бактериофагу M13, конъюгированные с пероксидазой хрена. Их эффективность подтверждена ELISA-тестом, выполненным экспертами компании, и компания гарантирует высокое качество продуктов.
Более подробная информация:
Антитело к бактериофагу M13 (HRP) [A5B3] (кат. № EM1902-18)
Новость от 24/06/2020